RH30 人横纹肌肉瘤细胞系的应用

背景^[1-3]

RH30人横纹肌肉瘤细胞系是一种用于研究人横纹肌肉瘤的实验细胞系。横纹肌肉瘤是一种罕见但具有高度侵袭性的恶性肿瘤，主要发生在儿童和青少年中。RH30细胞系被广泛用于研究横纹肌肉瘤的生物学特性、药物筛选和抗癌治疗等方面的研究。

RH30细胞系是通过将人体组织样本中的横纹肌肉瘤细胞进行体外培养而建立的。这种细胞系具有稳定的遗传背景和可重复性，为科研人员提供了可靠的实验模型。

RH30细胞系具有以下特点：

来源：RH30细胞系来源于一名5岁男孩的横纹肌肉瘤组织。

形态特征：RH30细胞呈梭形或纺锤形，具有多核和核分裂像。

生长特性：RH30细胞在体外培养条件下生长迅速，具有良好的增殖能力。

分子特征：RH30细胞表达多种横纹肌肉瘤相关的分子标志物，如肌动蛋白、肌球蛋白等。

药物敏感性：RH30细胞对多种化疗药物具有敏感性，如多柔比星、长春新碱等。

基因突变：RH30细胞中存在多个与横纹肌肉瘤发生相关的基因突变，如TP53、RB1等。

RH30人横纹肌肉瘤细胞系为横纹肌肉瘤的研究提供了一个重要的实验模型，有助于深入了解该疾病的发病机制、寻找新的治疗方法和药物筛选。

使用RH30细胞系进行实验研究时，需要注意正确的细胞复苏和培养条件，以确保细胞的健康和生长。此外，为了确保实验结果的准确性和可重复性，研究人员还需要遵循标准的实验操作规范和质量控制措施。

RH30人横纹肌肉瘤细胞系

RH30人横纹肌肉瘤细胞系细胞培养操作

1)复苏RH30人横纹肌肉瘤细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)RH30人横纹肌肉瘤细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)RH30人横纹肌肉瘤细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

RH30人横纹肌肉瘤细胞系可以用于小分子化合物DMAMCL抑制横纹肌肉瘤生长的作用及机制研究

通过探讨DMAMCL在体内、体外对横纹肌肉瘤的抗肿瘤作用及其机制,寻找治疗横纹肌肉瘤的新方法,为DMAMCL在横纹肌肉瘤中的临床应用提供理论基础和依据。

研究方法:1.本研究使用5个横纹肌肉瘤细胞系(RD、RH18、RH28、RH30人横纹肌肉瘤细胞系和RH41)和一个小鼠成纤维细胞系NIH3T3,均来自美国国立卫生研究院(NIH)Carol J Thiele博士的惠赠。在体外实验通过MTS方法检测细胞生存,使用Incucyte活细胞动态成像系统实时监测细胞融合率。通过计算CI值(药物联合指数)研究两种药物的联合作用。利用流式细胞仪通过PI(碘化丙啶)染色进行细胞周期检测。Caspase-Glo 3/7 Assay检测试剂盒检测Caspase3/7活性以及经caspase抑制剂Z-VAD预处理后细胞生存率的变化。

通过Western-Blot方法在蛋白水平检测RH30人横纹肌肉瘤细胞系及肿瘤组织中促凋亡分子Bim的表达情况;利用RT-qPCR在mRNA水平观察细胞及肿瘤组织中Bim的表达情况。通过小干扰siRNA转染技术沉默细胞中Bim表达进而研究其作用。在体内实验中通过将横纹肌肉瘤细胞系(RD、RH18、RH30人横纹肌肉瘤细胞系和RH41)种植于裸鼠皮下,待横纹肌肉瘤种植瘤长到一定大小进行不同剂量DMAMCL单药,化疗药物长春新碱单药及两药联合的抗肿瘤作用,比较在不同治疗条件下肿瘤生长情况,并分析小鼠生存情况。使用统计学软件SPSS 22.0对所得出的实验数据进行统计学分析,体外实验的数据均以均值±标准差(x±SD)表示;小鼠体内实验的数据均以均值±标准误差(x±SE)表示。两个药物的协同作用通过Compusyn软件以CI值(药物联合指数)表示(CI<1:两药联合有协同作用;CI=1:两药联合有叠加作用;CI>1:两药联合有拮抗作用;)。两组间实验数据的比较采用t检验方法,p<0.05则认为所得出的实验数据具有统计学意义。小鼠多组间生存分析实验数据采用对数秩检验(Log-Rank test),p<0.05则认为所得实验数据具有统计学意义。实验数据曲线图表采用GraphPad Prism 7或Photoshop 6软件绘制。

参考文献

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