CAL-78 人软骨肉瘤细胞系的应用

背景^[1-3]

CAL-78人软骨肉瘤细胞系是人软骨肉瘤细胞系的一种。这个细胞系来源于软骨肉瘤，具体是男性患者的病变组织。在培养过程中，这些细胞会贴壁生长，并且形态为上皮细胞样。

2.

CAL-78人软骨肉瘤细胞系

CAL-78人软骨肉瘤细胞系培养步骤：

1.复苏CAL-78人软骨肉瘤细胞系：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2.CAL-78人软骨肉瘤细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

2.1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

2.3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

2.4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

3.CAL-78人软骨肉瘤细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

应用^[4-5]

CAL-78人软骨肉瘤细胞系可以用于双调蛋白—E-钙黏蛋白表达调控对人软骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力影响的实验研究

探究双调蛋白对软骨肉瘤的影响及相关机制,也涉及探究软骨肉瘤细胞的上皮间质转化的过程,有助于人类加深对软骨肉瘤的认知,也对今后软骨肉瘤的诊断治疗的进步有着重要的意义。

方法:将一定浓度的双调蛋白配入完全培养基中,并将软骨肉瘤细胞系SW1353与CAL-78放入该培养基中培养获取受到双调蛋白影响的软骨肉瘤细胞。通过转染双调蛋白的Si RNA获得内源性双调蛋白下调的细胞,同时使用MEK抑制剂U0126和PI3K抑制剂LY294002处理细胞后获得阻断了相关通路的软骨肉瘤细胞,并将这些细胞再次以双调蛋白处理后进行下一步试验。采取Transwell侵袭实验、CCK8实验、划痕实验、黏附实验分别测量各组细胞的侵袭、增殖、迁移、黏附能力。利用Real-Time PCR和Western Blot实验测得了实验过程中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、SLUG等相关因子的蛋白和基因水平的变化。

结果:一、双调蛋白作用于软骨肉瘤细胞系SW1353及CAL-78后,两种细胞的侵袭力增强,且E-钙黏蛋白表达下降而N-钙黏蛋白、SLUG的表达上升,MEK/ERK和PI3K/AKT通路的相关蛋白磷酸化水平上升。

二、转染双调蛋白Si RNA、MEK抑制剂U0126和PI3K抑制剂LY294002处理后的软骨肉瘤细胞再次予以双调蛋白处理后,以上表现则受到抑制。

三、本实验还发现双调蛋白作用于软骨肉瘤细胞后,其迁移、增殖及黏附能力也有所增强,且Snail、Twist1等其他上皮间质转化过程中重要的调控因子的基因表达也有所上升。本研究所有试验重复三次,统计学检测p值均小于0.05,结果有显著性差异。

结论:本研究表明,双调蛋白通过下调E-钙黏蛋白的表达来增强软骨肉瘤细胞侵袭。MEK/ERK和PI3K/AKT通路与上皮间质转化过程可能参与这一过程。同时,双调蛋白对软骨肉瘤细胞的增殖、迁移和黏附能力也有增强的作用。

参考文献

[1]EML4-ALK G1202R mutation induces EMT and confers resistance to ceritinib in NSCLC cells via activation of STAT3/Slug signaling.Shen Jiwei;Meng Yuting;Wang Kunlun;Gao Minghuan;Du Jianan;Wang Junfang;Li Zengqiang;Zuo Daiying;Wu Yingliang.Cellular Signalling,2022

[2]Therapeutic Targets and Emerging Treatments in Advanced Chondrosarcoma.Miwa Shinji;Yamamoto Norio;Hayashi Katsuhiro;Takeuchi Akihiko;Igarashi Kentaro;Tsuchiya Hiroyuki.International Journal of Molecular Sciences,2022

[3]Methylation-mediated silencing of protein kinase C zeta induces apoptosis avoidance through ATM/CHK2 inactivation in dedifferentiated chondrosarcoma..Shimada Eijiro;Matsumoto Yoshihiro;Nakagawa Makoto;Susuki Yosuke;Endo Makoto;Setsu Nokitaka;Fujiwara Toshifumi;Iida Keiichiro;Nabeshima Akira;Yahiro Kenichiro;Kimura Atsushi;Hirose Takeshi;Kanahori Masaya;Oyama Ryunosuke;Oda Yoshinao;Nakashima Yasuharu.British journal of cancer,2022

[4]Propofol induces apoptosis and ameliorates 5?fluorouracil resistance in OSCC cells by reducing the expression and secretion of amphiregulin..Yang KungSsu;Che PiCheng;Hsieh MingJu;Lee INeng;Wu YuPing;Chen MingShan;Chen JuiChieh.Molecular medicine reports,2022

[5]张然.双调蛋白—E-钙黏蛋白表达调控对人软骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力影响的实验研究[D].安徽医科大学,2023.