UMNSAH/DF-1 鸡胚胎成纤维细胞系

1）准备DMEM（NaHCO3 1.5g/L）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%；细胞冻存后复苏存活率只有50%左右，建议加大冻存密度。

2）UMNSAH/DF-1鸡胚胎成纤维细胞系培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：39℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）UMNSAH/DF-1鸡胚胎成纤维细胞系冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

UMNSAH/DF-1鸡胚胎成纤维细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于39℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。