HEPES 缓冲液

HEPES是用于生物研究的常用通用缓冲液之一。在生理pH下，该分子是两性离子的，并在pH 6.8至8.2下可有效作为缓冲剂。HEPES广泛应用于细胞和组织培养，蛋白质纯化和提取，免疫沉淀，细胞裂解，活细胞成像和其他生物/生化研究，并在某些细胞培养基中用作缓冲试剂。HEPES可用于Mg的体外实验。 白色结晶粉末，易溶于水，溶解度随温度升高而增加。在pH 6.0-8.5范围内具有较强的缓冲能力，可以有效地维持实验体系的pH稳定。
对细胞无毒副作用：适用于各种细胞培养实验。
稳定性：在室温下可以长时间保持稳定，不易分解或变质。但在暴露于光线中时，会产生过氧化氢，这对培养的细胞或其他有生物活性的物体可能会产生毒性，因此在使用HEPES作为缓冲液时应尽量在避光条件下进行。 (1) hepes缓冲液可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌.每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 调pH至7.2,滤过除菌后使用.此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。
(2) 亦可配成 100 x 贮存液（l mol/L），使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L（100 x）hepes缓冲液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中,用lN NaOH调pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶（2ml/瓶）,4℃或-20℃保存。 HEPES常用于各种类型生物体的细胞培养基中；在蛋白质研究中，PIPES常用作阳离子交换色谱法中结合缓冲液的组分和洗脱液；在DNA研究中，PIPES用作磷酸钙和DNA沉淀物形成体系的缓冲液，AFM以及电穿孔实验中的缓冲液。另外，HEPES对DNA和限制酶之间的反应有一定干扰，也不适合用于Lowry氏法测定蛋白质含量。