人血清的应用

背景^[1-6]

人血清采用正常人血液为原料原料，经无菌采集、分离、微孔过滤后而成。本产品无支原体、无病毒、无噬毒体、内毒素含量低于1EU/ml，适用于细胞、组织器官培养、细胞株保藏、单抗研制，是医院、科研院校、动物疫苗、生物制药厂家重要培养基之一。

人血清的保存应该注意以下几点：(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中保质期5年.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.(2)热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。

正常人血清的作用和用途：人血清（混合型）为实验材料，作为质控品原料、动物免疫、病理组化封闭、血清IgG制备、细胞培养（需自行灭活、除菌）、ELISA等免疫实验中的封闭及保护剂的使用，仅供科研实验，不能作为医用。

1. 提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。

2. 提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。

3. 提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。

4. 提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。

5. 对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。

应用^[7][8]

人血清可用于对培养心肌细胞基因表达谱的影响研究：

在心肌淀粉样变人血清对培养心肌细胞基因表达谱的影响实验中利用基因表达谱芯片技术筛选正常人血清和心肌淀粉样变患者血清干预培养心肌细胞的差异表达基因,以探讨淀粉样变心肌病发病的可能机制。

方法:通过将分离的血清稀释10倍后干预培养SD乳鼠心肌细胞建立模型,采用CCK-8检测各组细胞活性抑制程度,基因表达谱芯片技术筛选两组大鼠差异表达基因,采用实时定量PCR验证相关基因表达量。结果:CCK-8显示与正常control组相比,阴性对照组细胞存活率略有下降,但无统计学意义。与control组相比,实验组细胞存活率明显下降至约70%(P<0.05)。基因芯片分析显示,患者血清实验组及正常血清对照组两组相比,差异表达的基因有869条,其中上调基因710条,下调基因159条。

实验组中胶原形成相关基因Col1a1、Col3a1、Col5a2、Col6a1、Col6a2、Col6a3,促纤维形成相关基因Lama1、Itga4、Vwf、Mmp14的表达均明显上调(P<0.05);影响血管重建相关基因Angptl4、Asb4、Cited1表达下调(P<0.05)。经RT-PCR验证,结果一致。结论:心肌淀粉样变患者血清干预影响培养心肌细胞的活性,促进胶原纤维形成并影响血管重建。淀粉样变心肌病的病理机制涉及多个基因,其中基质纤维化、血管重建受阻对淀粉样变心肌病的发生发展起着至关重要的作用,其具体机制还有待进一步研究。

参考文献

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