对Hep G2/人肝癌细胞的相关研究

背景及概述^[1]

Hep G2细胞是来自15岁男性白人的组织。传代方法：将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约4min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；生长条件：37℃，5%CO₂，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，丙酮酸钠。存储条件：冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

相关研究^[2-5]

杨雪等人探讨了抑制CIP2A表达对肝癌细胞HepG2生物学特性的影响。方法运用前期实验已构建成功的重组腺相关病毒载体rAAV2-EGFP-CIP2A shRNA转染肝癌细胞系HepG2，MTT法检测细胞增殖生长情况，流式细胞仪测定细胞凋亡，Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭力。建立裸鼠皮下种植瘤模型，观察裸鼠移植瘤生长，30d后处死裸鼠检测肿瘤生长体积及质量，免疫组化法检测移植瘤组织内CIP2A蛋白的表达。结果 MTT及流式细胞仪结果显示，下调CIP2A表达后肝癌细胞HepG2增殖受到抑制，细胞凋亡增加；Transwell小室侵袭实验提示细胞侵袭能力下降。裸鼠皮下种植瘤结果发现，实验干扰组裸鼠皮下种植瘤生长速度、最终体积及质量明显小于空白对照组及空载病毒组，移植瘤组织内CIP2A蛋白表达明显降低。结论 CIP2A促进肝癌细胞HepG2增殖、侵袭以及体内肿瘤生长。

计莉强等人探讨了败酱草单萜环烯醚酯类(patrinia monoterpene iridoid ether esters，PMIEE)对HepG2和MCF7细胞增殖抑制和凋亡的影响。方法 HepG2和MCF7细胞经PMIEE作用后，采用CCK8法检测细胞增殖抑制情况；Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡及周期情况；细胞划痕实验检测细胞迁移状况；Western blot法检测Bcl-2、Bax、caspase3、cdc2和CyclinB1的表达情况。结果 CCK8、划痕实验和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测显示，PMIEE对HepG2和MCF7细胞均有显著的增殖抑制、促凋亡率和降低迁移率作用(P<0.05)，呈一定量效关系，且PMIEE对HepG2细胞的周期阻滞以G2/M期为主，MCF7细胞以G0/G1期为主；Western blot结果显示，PMIEE可显著下调2种细胞Bcl-2、cdc2、CyclinB1的表达，上调Bax和caspase3的表达水平。结论 PMIEE可诱导HepG2和MCF7细胞增殖抑制和凋亡，下调Bcl-2、cdc2和CyclinB1表达及上调Bax和caspase3表达，其抗癌的潜在机制可能与此有关。

从彦丽等人通过模拟胃肠消化法评价柑橘类水果(宽皮柑、脐橙和金桔)的多酚生物有效性和抗肿瘤细胞增殖的活性。柑橘水果经过模拟胃肠消化后，采用高效液相色谱法测定主要多酚单体的释放量，亚甲基蓝法测定柑橘水果提取物抗Hep G2细胞增殖的活性。结果表明，释放量较大(>20 mg/kg FW)的柑橘多酚是新橙皮甙、根皮苷、柚皮素、香草酸、原儿茶酸等。模拟胃消化过程可以促进根皮苷、香草酸、原儿茶酸的释放，而所检测的大部分多酚在肠消化过程显著降解(p<0.05)。宽皮柑、脐橙和金桔模拟胃肠消化后其产生细胞毒性的浓度显著降低(p<0.05)，模拟胃消化及模拟肠消化后的提取物(浓度分别为84.56、93.74、32.26 mg/mL和121.23、107.14、40.03 mg/mL)作用于Hep G2细胞72 h后，细胞的存活率分别为65.46%、37.20%、24.19%和21.32%、43.52%、12.31%，表明模拟胃肠消化过程可以促进抗Hep G2细胞增殖的活性物质释放。

庞艺萌对姜黄素超分子包合物抑制HepG2肝癌细胞增殖的作用进行研究。采用MTT法考察不同浓度的姜黄素超分子包合物(40～640μg/m L)处理HepG2细胞不同时间(24 h、48 h和72 h)后对其细胞存活率的影响。然后，采用流式细胞术和测定Caspase3/8/9酶活来探讨姜黄素超分子包合物抑制HepG2细胞增殖的作用机理。

实验结果表明，随着姜黄素超分子包合物处理时间和浓度的增加，HepG2细胞的存活率呈现出逐渐下降的趋势，当处理时间为72 h，姜黄素超分子包合物浓度为640μg/m L时，细胞的存活率达到最低为9.81%±1.00%。进一步的流式细胞术分析得知，HepG2细胞内的凋亡细胞数目随着姜黄素超分子包合物浓度的增加而增加，当细胞经640μg/m L姜黄素超分子包合物处理72 h后，其细胞内凋亡细胞的数目(Sub-G1)达到最高为93.43%。通过对Caspase 3/8/9的酶活进行检测发现，Caspase 3/8/9的酶活也是随着姜黄素超分子包合物浓度的增加而增加，当640μg/m L姜黄素超分子包合物处理细胞72 h后，Caspase 3/8/9的酶活达到。进一步地Western blot实验结果也表明，随着姜黄素超分子包合物浓度的增加，Caspase3/8/9的蛋白表达水平呈升高趋势。上述实验结果表明，姜黄素超分子包合物是通过线粒体途径和死亡受体途径来诱导细胞发生凋亡从而抑制HepG2细胞增殖。

主要参考资料

[1] Hep G2/人肝癌细胞说明书

[2] 杨雪，张靖，韩少山，陶杰，孙昊，刘青光.抑制CIP2A表达对肝癌细胞HepG2生物学特性影响的体内外研究[J/OL].西安交通大学学报(医学版):1-6[2019-04-05].http://kns.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20190326.0918.006.html.

[3] 计莉强，吴景敏，闵炜，陈毅芳，谢明华.败酱草单萜环烯醚酯类对Hep G2、MCF7细胞增殖及凋亡的影响?[J].中国现代应用药学，2019，36(06):692-697.

[4] 从彦丽，唐旭蔚，刘冬，孙海燕，彭梦雪.柑橘模拟胃肠消化后的多酚生物有效性和抗Hep G2细胞增殖活性[J/OL].现代食品科技:1-8[2019-04-05].http://kns.cnki.net/kcms/detail/44.1620.TS.20190306.1005.002.html.

[5]庞艺萌，彭莞仪，赵浩，荣利远，陈建平.姜黄素超分子包合物抑制HepG2肝癌细胞的增殖[J/OL].现代食品科技:1-6[2019-04-05].http://kns.cnki.net/kcms/detail/44.1620.ts.20190304.1648.010.html.