SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系是一种常用的实验细胞系，用于研究人子宫内膜癌的生长和扩散等过程。这种细胞系具有贴壁生长的特性，因此在进行实验时需要将其种植在适当的支持物上。

SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系的保存和运输通常在液氮中完成，以确保细胞的活性和纯度。在实验中，通常将这种细胞系种植在适当的支持物上，如玻璃瓶或塑料培养皿中，并使用适当的培养基进行培养。

SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系的细胞形态为上皮细胞样，具有贴壁生长的特性。

SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系

SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系细胞培养操作

1)复苏SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系可以用于人子宫平滑肌肉瘤干细胞样细胞的分离及其特性的初步鉴定

从SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系细胞(SK-UT-1cells)中分离和培养子宫平滑肌肉瘤干细胞样细胞(Uterine leiomyosarcoma stem cell like cells,ULSSCLCs),并对其干细胞特性进行鉴定,以揭示肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)在子宫平滑肌肉瘤发生、发展中存在重要作用。

方法：用含有生长因子的无血清培养基(Serum free medium,SFM)悬浮培养SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系,筛选出悬浮球细胞,并将其命名为子宫平滑肌肉瘤干细胞样细胞ULSSCLCs);采用流式细胞技术、有限稀释法、交替在含血清培养基(SSM)和SFM培养基中培养、台盼蓝染色、Transwell小室、流式细胞技术分别检测SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系和ULSSCLCs干细胞表面标志物CD133的表达差异、ULSSCLCs单个细胞成球能力、ULSSCLCs的分化能力、SK-UT-1cells及ULSSCLCs的增殖能力的差异、SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系及ULSSCLCs的体外迁移、侵袭能力以及对不同浓度顺铂作用下的耐药能力的差异。

结果：1、SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系能在SFM中形成可以稳定传代的ULSSCLCs,目前已传到第7代。

2、在CD133的表达中,ULSSCLCs高于SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系,差异有统计学意义(P<0.05),并且随ULSSCLCs代数增加其表达量增高。

3、有限稀释法可以在显微镜下观察到单个细胞成球全过程。

4、将SFM中的ULSSCLCs接种于SSM中后可重新贴壁分化,分化后细胞与SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系形态无明显差异。

5、在增殖试验中,ULSSCLCs增殖能力强于SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系,差异有统计学意义(P<0.05)。

6、ULSSCLCs迁移(215+14个)、侵袭(161±15个)能力显著高于SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系(106±11个).(61±7个),差异有统计学意义(P<0.05)。

7、SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系和ULSSCLCs经化疗药物顺铂诱导凋亡48h后,DDP浓度为40μmol/L、80μmol/L、150μmol/L时,SK-UT-1cells凋亡率高于ULSSCLCs,差异有统计学意义(P<0.05)。SK-UT-1cells和ULSSCLCs的周期分布在顺铂处理前无明显差异(P>0.05),两组细胞经顺铂处理48小时之后：处于S期的SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系比例较处理前明显减少(P<0.05),ULSSCLCs处于G2期的细胞比例较处理前明显升高(P<0.05)。

结论：1、成功从SK-UT-1人子宫内膜癌贴壁细胞系中筛选出ULSSCLCs。

2、ULSSCLCs高表达肿瘤干细胞表面标记物CD133、并具有更强的自我更新、多向分化、增殖、迁移、侵袭及耐药能力。

参考文献

[1]Wnt signaling in adult intestinal stem cells and cancer.Michaela Krausova;;Vladimir Korinek.Cellular Signalling,2014

[2]Complexity of cancer stem cells.Eiji Sugihara;;Hideyuki Saya.Int.J.Cancer,2012

[3]Epigenetic alterations involved in cancer stem cell reprogramming..Molecular Oncology,2012

[4]Cancer stem cells.Zuoren Yu;;Timothy G.Pestell;;Michael P.Lisanti;;Richard G.Pestell.International Journal of Biochemistry and Cell Biology,2012

[5]王旭.人子宫平滑肌肉瘤干细胞样细胞的分离及其特性的初步鉴定[D].中南大学,2015.