大鼠肾足细胞的应用

背景^[1-3]

大鼠肾足细胞是一种在肾脏中起重要作用的细胞类型，主要负责维持肾小球滤过膜的完整性和选择性通透性。

大鼠肾足细胞特点：

形态特征：大鼠肾足细胞呈多角形或长方形，大小约为20-30微米×10-20微米。它们具有许多细长的突起，称为足突，这些足突相互连接形成一个网状结构，覆盖在肾小球毛细血管壁上。

功能：大鼠肾足细胞的主要功能是维持肾小球滤过膜的完整性和选择性通透性。它们通过足突上的蛋白质通道和转运体来调节物质的进出，从而保持血液中的水分、电解质和其他重要物质的平衡。此外，大鼠肾足细胞还参与了免疫反应和炎症反应等生理过程。

疾病相关：大鼠肾足细胞与多种肾脏疾病有关，如糖尿病肾病、肾小球肾炎等。这些疾病会导致足细胞受损或死亡，进而导致肾小球滤过膜的破坏和功能障碍。因此，对大鼠肾足细胞的研究有助于深入了解这些疾病的发病机制和治疗方法。

大鼠肾足细胞

大鼠肾足细胞培养方法：

1、大鼠肾足细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、大鼠肾足细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、大鼠肾足细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

应用^[4-5]

大鼠肾足细胞可以用于红景天对2型糖尿病肾病大鼠肾足细胞影响的研究

探讨红景天对糖尿病肾病大鼠血糖、晚期氧化蛋白产物(Advanced Oxidation Protein Products,AOPPs)、尿微量白蛋白(microalbumin,mALB)、大鼠肾足细胞的影响,分析红景天治疗DN的作用机制,从而有效控制DN患者病情,延缓肾功能衰竭,提高患者生存质量。

方法：实验动物中心提供的SPF级雄性8周龄Wistar大鼠共60只随机分为空白对照组(n=10,编号)和糖尿病肾病模型组(n=50,编号),对糖尿病肾病模型组大鼠高糖高脂饮食后应用链脲佐菌素造糖尿病肾病大鼠模型,将造模成功的40只糖尿病肾病大鼠随机平分成4组：糖尿病肾病模型对照组(n=10)、红景天治疗小剂量组(n=10)、红景天治疗中剂量组(n=10)、红景天治疗大剂量组(n=10),各组大鼠除普通饮食喂养外红景天小、中、大剂量治疗组分别给予红景天3、6、12g/kg/d汤剂灌肠,1月后将各组大鼠分别空腹抽血送检查空腹血糖(Fasting Blood Glucose,FBG)、AOPPs及mALB,各组大鼠在麻醉状态下取肾皮质2-10毫米,低温固定液固定标本,立即送新乡医学院电镜室,病理切片查大鼠肾足细胞计数、足突平均宽度(FPW)及足突融合率、肾小球基底膜(Glomerular Basement Membrane,GBM)平均厚度。

结果：1、mALB的统计数据结果分析：

①糖尿病肾病模型对照组与空白对照组相比：尿微量白蛋白升高,具有统计学极显著性差异(P<0.01)；

②红景天各剂量治疗组与糖尿病肾病模型对照组相比：尿微量白蛋白减少,具有统计学极显著性差异(P<0.01);

③红景天各剂量治疗组与空白对照组相比：尿微量白蛋白升高,具有统计学显著性差异(P<0.05)；

④红景天各剂量治疗组之间无统计学差异(P>0.05)。

2、FBG的统计数据结果分析：模型对照组、红景天各剂量治疗组与空白对照组相比：空腹血糖均有显著性增高,具有统计学极显著性差异(P<0.01)；红景天各剂量治疗组与模型对照组比较：空腹血糖降低,具有统计学显著性差异(P<0.05)。

3、AOPPs的统计数据结果分析：糖尿病肾病模型对照组与空白对照组相比：

①血AOPPs升高,具有统计学极显著性差异(P<0.01);

②红景天各剂量治疗组与糖尿病肾病模型对照组相比：血AOPPs降低,具有统计学极显著性差异(P<0.01);

③红景天各剂量治疗组与空白对照组相比：血AOPPs升高,具有统计学显著性差异(P<0.05)；

④红景天各剂量治疗组之间无统计学差异(P>0.05)。

4、各组大鼠肾足细胞计数、足突宽度、足突融合率、肾小球基底膜平均厚度的比较：

①糖尿病肾病模型对照组足细胞个数明显低于其它各组,足突融合率、足突宽度和GBM平均厚度明显高于其它各组,具有统计学显著性差异(P<0.05)；

②各红景天治疗组与糖尿病肾病模型对照组相比：足细胞个数多、足突融合率低、GBM平均厚度和足突宽度低,具有统计学显著性差异(P<0.05)。

结论：红景天可以降低2型糖尿病肾病大鼠的FBG、AOPPs、mALB水平,可以改善2型糖尿病肾病大鼠肾足细胞超微结构,减轻DN大鼠肾足细胞的减少、融合,降低足突宽度、肾小球基底膜平均厚度,起到肾脏保护作用。

参考文献

[1]Clinical Factors Associated With the Diagnosis and Progression of Diabetic Nephropathy.Shuang Liang;;Qian Li;;Han-Yu Zhu;;Jian-Hui Zhou;;Rui Ding;;Xiang-Mei Chen;;Guang-Yan Cai.Cell Biochemistry and Biophysics,2014

[2]Determination of oxidative stress and cellular inflammation in patients with diabetic nephropathy and non-diabetic nephropathy being administered hemodialysis treatment due to chronic renal failure.Emre Avci;;Erdinc?akir;;Sule Coskun Cevher;;Halil Yaman;;Mehmet Agilli;;Cumhur Bilgi.Renal Failure,2014

[3]Oxidative Stress:Meeting Multiple Targets in Pathogenesis of Diabetic Nephropathy.Mandeep Kumar Arora;;Umesh Kumar Singh.Current Drug Targets,2014

[4]Renoprotective effects of olmesartan medoxomil on diabetic nephropathyin streptozotocin?induced diabetes in rats.Xiaofei Si;;Peng Li;;Yan Zhang;;Yan Zhang;;Wei Lv;;Dong Qi.Biomedical Reports,2014

[5]郭永新.红景天对2型糖尿病肾病大鼠肾足细胞影响的研究[D].新乡医学院,2016.