枯草芽孢杆菌的制备方法

枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种细菌，为革兰氏阳性的好氧性菌，普遍存在于土壤及植物体表，在人体亦可发现在肠道内共生的枯草杆菌。型态上的主要特征是菌体表面生有鞭毛，体内形成的内生孢子可抵抗恶劣的外在环境而存活。最近的研究显示，枯草杆菌其实并不全然是好气性的。枯草杆菌在食品和饲料添加剂上广泛使用，如日本人使用该菌的纳豆亚种（var. natto）将黄豆发酵成为纳豆和韩国料理中的清麹酱，近年来使用在种子保护及生物防治上，也经常被拿来应用。临床医学上是属于安全性的有益微生物。 

制备方法

CN1782068A公开一种枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征是：

(1)采样：将采样工具及各种采样容器进行灭菌，在豆腐生产工厂附近下水道的淤泥中进行多点采样；

(2)稀释：将采集的样品混合均匀，称取10克样品，溶解于100mL无菌水中，其中装有80-100粒玻璃珠，用力摇动10分钟，静止一分钟，用1mL无菌吸管吸取1mL上清液，移入9mL无菌水试管中，彻底摇匀，然后再从9mL的稀释样中取出1mL样品再移入9mL无菌试管中，彻底摇匀，如此依次进行稀释，直至稀释到10-9；

(3)分离：从上述稀释的样品中用0.1mL无菌吸管分别取出0.1mL样品，移入琼脂平板培养基中，用无菌三角刮棒，涂布均匀，每个稀释度做两个重复，琼脂平板培养基的配方：大豆分离蛋白6.0g、葡萄糖3.0g、氯化钠0.5g、脱脂乳粉4.0g、琼脂粉1.5g、加入1.6％的溴甲酚绿乙醇溶液1mL、pH7.0，121℃灭菌20分钟；

(4)培养：将涂布的平板置于37℃培养箱中倒置培养24小时，观察挑菌；

(5)挑菌：将菌落周围有透明圈的菌落挑入试管斜面中，挑取50个菌落，然后再进行二次分离纯化，最后得到纯培养，从上述50株菌种中选出两株透明圈者，进行紫外线照射诱变；

(6)紫外线诱变初筛：将其中两株菌分别在牛肉膏蛋白胨培养基中进行培养12小时，取出离心，用无菌水洗涤两次，再用生理盐水稀释，用玻璃珠摇匀打碎，使细胞数达到107，在30W紫外灯下，距离10cm照射6分钟，红光下操作，然后涂布于上述琼脂平板上，避光培养36小时。挑取菌落，移入试管斜面中，挑取50株菌株；

(7)复筛：将50株菌种逐个进行培养、性能测试，从其中筛选出2株性能者，再进行诱变筛选，反复进行3次，最后得到良菌种L-B-05进行菌种鉴定。

应用

一种枯草芽孢杆菌的应用方法，其特征是：

以植物蛋白为原料，原料先进行预处理，加水配制成重量百分比浓度为6-18％，调整PH值为6.0-7.0，然后在121℃高温下进行灭菌处理，冷却至30-35℃，按重量百分比为5.0-10.0％接入培养成熟的枯草芽孢杆菌L-B-05菌种，通入无菌空气，进行搅拌发酵，发酵时保持温度在35℃±2℃，发酵周期为24-48小时；发酵结束在121℃温度下进行高温灭活，先进行过滤分离或精制，浓缩至25-40Bx，喷雾干燥制成产品。