DA-MB-231人乳腺癌细胞的应用

背景^[1-3]

MDA-MB-231人乳腺癌细胞来自患有转移乳腺腺癌的51岁白种人女病人的胸水。在裸鼠和ALS处理的BALB/c小鼠中，它能形成低分化腺癌（III级）。细胞表达WNT7B致癌基因。此细胞株可能作为转染宿主。

MDA-MB-231人乳腺癌细胞

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染。

2）在显微镜下确认细胞生长状态时，在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1)L15基础培养基；优质胎牛血清，10%；1%双抗。

关于细胞培养的注意事项：

（1）该培养基不需要通入CO2

（2）细胞形态大部分为纺锤状，也有部分细胞呈现圆形，培养过程中会有少量悬浮细胞。

（3）如果细胞生长太过缓慢，可以适当提高血清浓度到15%-20%。

2)培养条件：气相：空气，100%；温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于京大戟中单体月腺大戟素A对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响研究

运用网络药理学的方法分析京大戟治疗乳腺癌的潜在作用机制,并通过细胞实验,观察京大戟中单体化合物月腺大戟素A对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。

材料与方法:1.运用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）检索获取京大戟的化合物成分及相关靶点,使用Gend Cards和OMIM数据库筛选乳腺癌疾病靶点,借助Cytoscape（3.7.2）软件,构建“药物-关键化合物-疾病靶点”的可视化网络图;通过String数据库平台构建PPI蛋白互作网络,再利用Bioconductor平台进行GO富集分析和KEGG通路富集分析。

2. 运用CCK-8实验方法检测月腺大戟素A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖是否有影响,月腺大戟素A的药物浓度分别为5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L、60mmol/L、80mmol/L、100mmol/L,并计算出IC50值;用流式细胞术检测月腺大戟素A（50mmol/L、100mmol/L）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期以及凋亡的影响。

结果:1.通过筛选得到与疾病靶点有关的京大戟关键化合物共7个,其主要通过调控GSK3B、ESR1、MAPK14、PTGS2、ADRB2、AR、ESR2等靶基因及雌激素信号通路、甲状腺激素信号通路、催乳素信号通路、乳腺癌相关通路等来发挥治疗乳腺癌的作用。

2.月腺大戟素A在不同浓度与不同时间下均有抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞增殖的作用,表现出明显的时间和浓度依赖性。且药物对于MDA-MB-231细胞的抑制作用较MCF-7细胞更为明显:MDA-MB-231的IC5048h为566.88μmol/L,IC5072h为:106.76μmol/L;MCF-7的IC5048h为844.32μmol/L,IC5072h为362.43μmol/L（P<0.05,有统计学意义）。

3.将50μmol/L和100μmol/L的月腺大戟素A处理MDA-MB-231细胞72h后经流式细胞仪检测,结果显示细胞G0/G1期比例逐渐下降,G2/M期占比逐渐升高（P<0.05）,细胞阻滞于G2/M期。

4.将50μmol/L和100μmol/L的月腺大戟素A处理MDA-MB-231细胞72h后经流式细胞仪检测,结果显示月腺大戟素A可诱导细胞的凋亡,且主要诱导细胞在晚期凋亡。

结论:1.通过网络药理学的分析,可得到京大戟是通过多成分、多靶点、多通路的形式实现抗乳腺癌的作用的。

2.月腺大戟素A在5mmol/L-100mmol/L的浓度下处理乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞48 h与72h后均有明显的抑制细胞增殖的作用,抑制作用随时间的延长而增强,且药物对MDA-MB-231细胞的抑制作用较MCF-7细胞更为显著。

3.不同浓度的月腺大戟素A作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞后,均出现了细胞周期阻滞,且阻滞在G2/M期。

参考文献

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[5]申博蔚.京大戟中单体月腺大戟素A对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响[D].辽宁中医药大学,2021.