冠状动脉内皮细胞的应用

背景^[1-3]

冠状动脉内皮细胞人冠状动脉内皮细胞分离自冠状动脉组织采用混合酶短暂消化后组织贴块、结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部，分左右两支，行于心脏表面。采用Schlesinger等的分类原则，将冠状动脉的分布分为三型：右优势型、均衡型、左优势型。左右冠状动脉是升主动脉的对分支。

左冠状动脉为一短干，发自左主动脉窦，经肺动脉起始部和左心耳之间，沿冠状沟向左前方行后，立即分为前室间支和旋支。前室间支沿前室间沟下行，旋支绕过心尖切迹至心的膈面与右冠状动脉的后室间支相吻合。

冠状动脉内皮细胞呈单层扁平分布，是一薄层的专门上皮细胞，它形成冠状动脉的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最小的微血管。

冠状动脉内皮细胞

内皮细胞也称血管内皮细胞，通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，它形成血管的内壁。它们具有吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，还参与机体免疫活动功能。

血管内皮细胞通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，也称内皮细胞。在炎症时高表达黏附分子，与血流中白细胞表面黏附分子相互作用，从而介导白细胞穿越血管壁。

应用^[4][5]

用于MicroRNA-210在LPS诱导的人冠状动脉内皮细胞炎症模型中对自噬和炎症的作用及机制研究

以HCAEC人冠状动脉内皮细胞为研究对象,应用LPS刺激构建炎症模型,研究miR-210在炎症过程中对自噬和炎症的影响及作用机制。并以ATG7为切入点,研究在上述过程中对自噬、炎症的调控作用。从而为miR-210应用于心血管疾病的预防与治疗提供新的线索和思路。

方法1.应用LPS处理HCAEC细胞,构建炎症损伤模型。使用CCK-8活性检测试剂盒检测细胞生存率,乳酸脱氢酶检测试剂盒检测LDH释放量。通过Western blot检测炎症过程中LC3B,Beclin1等自噬相关蛋白的表达,并通过免疫荧光染色观察LC3B的点状聚集,观察LPS诱导下自噬的变化,并检测细胞中炎症相关蛋白IL-1β,Caspase-1,NLRP3的表达,探究LPS对NLRP3依赖的炎症相关蛋白表达的影响。

2. 应用实时定量PCR检测不同时间点的LPS刺激下miR-210的表达水平。通过慢病毒转染,构建miR-210高表达、低表达细胞模型,再次检测细胞活性、LDH释放量,观察miR-210对HCAEC细胞活性及损伤的影响。利用Western blot法检测LC3B,Beclin1蛋白的表达,并通过免疫荧光染色观察LC3B的点状聚集。

利用Western blot法检测IL-1β,Caspase-1,NLRP3蛋白的表达,来探究miR-210对炎症的作用。应用3-MA抑制自噬,通过HCAEC细胞活性检测,LDH释放量检测,自噬相关蛋白LC3B,Beclin1和炎症相关蛋白IL-1β,NLRP3,Caspase-1表达的Western blot检测,探究自噬在LPS诱导的炎症模型中的作用。

参考文献

[1]Late Intravenous Immunoglobulin Treatment in Patients With Kawasaki Disease.Hiromi Muta,Masahiro Ishii,Mayumi Yashiro.Pediatrics.2012

[2]Arachidonic acid cytochrome P450 epoxygenase pathway.Spector Arthur A.Journal of Lipid Research.2008

[3]Serum levels of p60 soluble tumor necrosis factor receptor during acute Kawasaki disease.Susumu Furukawa,Tomoyo Matsubara,Yoshimi Umezawa,Ko Okumura,Keijiro Yabuta.The Journal of Pediatrics.1994

[4]The role of 14,15-dihydroxyeicosatrienoic acid levels in inflammation and its relationship to lipoproteins.Yang T,Peng R,Guo Y,et al.Lipids Health Dis.2013

[5]李明.MicroRNA-210在LPS诱导的人冠状动脉内皮细胞炎症模型中对自噬和炎症的作用及机制研究[D].吉林大学,2020.