HACAT细胞专用培养基

背景^[1-3]

HACAT细胞专用培养基适用于HACAT细胞各个时期的无菌培养。HACAT细胞专用培养基包含HACAT细胞生长所需的各种物质，不需要额外添加血清和其他成分可直接用于HACAT细胞的体外培养。

HACAT细胞是人永生化角质形成细胞，源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤，角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白阳性。生长形态为上皮样贴壁生长。

培养条件

1．无菌环境

无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。

3.适宜的渗透压

高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此，渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力，实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。

4．气体环境与pH

细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。

液体培养基保存：

液体培养基应于4℃冰箱避光保存，实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良，可以再添加适量L-谷氨酰胺。

应用^[4][5]

用于湿疹纳米乳膏成分对淋巴细胞和HaCaT细胞共培养的实验研究

慢性湿疹患者Thl/Th2细胞分化失衡引起的细胞因子分泌异常影响着湿疹的发生发展过程,慢性湿疹患者皮损研究提示T淋巴细胞浸润在慢性湿疹发病机制中有重要作用,活化的T细胞诱导角质形成细胞的凋亡为湿疹慢性化的转折点,阻断角质形成细胞的凋亡可以减轻湿疹慢性化进程的发生。

HaCaT细胞株保持有正常人角质形成细胞的分化和增殖特性,为通用的研究角质形成细胞生理功能的模型,探索采用淋巴细胞和HaCaT细胞共培养来建立慢性湿疹的体外细胞模型,以进行慢性湿疹的药效学实验和药物筛选实验具有重要意义。

进行淋巴细胞和HaCaT细胞共培养的实验研究,观察湿疹纳米乳膏成分对慢性湿疹体外细胞模型HaCaT细胞的凋亡率,研究慢性湿疹体外细胞模型的建立及湿疹纳米乳膏成分治疗慢性湿疹的作用机制,为慢性湿疹体外细胞模型的建立及临床用药提供实验依据。

方法：通过正交设计实验探索建立淋巴细胞和HaCaT细胞共培养的凋亡模型,模拟慢性湿疹体外细胞的部分发病机制,采用MTT实验观察湿疹纳米乳膏主要成分对HaCaT细胞活力影响的浓度,流式细胞仪和TUNEL法检测药物干预细胞共培养模型后HaCaT细胞的凋亡率。

参考文献

[1]A Circadian Clock in HaCaT Keratinocytes[J].Florian Sp?rl,Katja Schellenberg,Thomas Blatt,Horst Wenck,Klaus-Peter Wittern,Annika Schrader,Achim Kramer.Journal of Investigative Dermatology.2011(2)

[2]Corneal Abnormalities in the NC/Nga Mouse:An Atopic Dermatitis Model[J].Nobuyuki Ebihara,Toshinari Funaki,Hiroshi Matsuda,Ko Okumura,Akira Murakami,Chisei Ra.Cornea.2008(8)

[3]Absence of T-regulatory cell expression and function in atopic dermatitis skin[J].Johan Verhagen,Mübeccel Akdis,Claudia Traidl-Hoffmann,Peter Schmid-Grendelmeier,DirkJan Hijnen,Edward F.Knol,Heidrun Behrendt,Kurt Blaser,Cezmi A.Akdis.The Journal of Allergy and Clinical Immunology.2006(1)

[4]Keratinocytes Induce Local Tolerance to Skin Graft by Activating Interleukin-10–Secreting T Cells in the Context of Costimulation Molecule B7-H11[J].Yingping Cao,Hong Zhou,Jian Tao,Zexian Zheng,Ningli Li,Baihua Shen,Tsi-Siang Shih,Jian Hong,Jingwu Zhang,Kuang-Yen Chou.Transplantation.2003(8)

[5]刘学伟.湿疹纳米乳膏成分对淋巴细胞和HaCaT细胞共培养的实验研究[D].湖南中医药大学,2013.