三糖铁琼脂的制备方法

背景及概述^[1]

三糖铁琼脂是常用的分离纯化及鉴别培养基，其有效期约1~2周，常因水分蒸发干裂而失效。基层医院做细菌培养标本量少，如果准备过多，因失效变质，造成浪费；若准备量少，则称量误差大，成本较高。生化质控品冰冻保存有效期远远大于4℃或常温保存的期限。目前三糖铁琼脂培养基只能观察细菌对乳糖、葡萄糖、蔗糖利用及是否产生硫化氢的情况，初步判断细菌的类属；由于不分层，也不能观察细菌动力。随着生物研究的进展，国内外对细菌鉴别的研究也在不断的发展中。

性状

制备^[1]

一种能克服已有鉴别培养基不足的三糖铁琼脂培养基。与其它同类培养基相比具备下列特点：培养基分上下层，上层加入蛋白胨、氯化钠、琼脂(固体)、乳糖、葡萄糖、硫酸亚铁、硫代硫酸钠、酚红、尿素、玫瑰红酸；下层加入蛋白胨、氯化钠、琼脂(半固体)、甘露醇、中国蓝进行配方，提供一种既能观察细菌是否产生硫化氢及对糖的发酵能力，又能观察细菌是否有动力及分解尿素、甘露醇的情况。三糖铁琼脂培养基选择的配方如下：上层：蛋白胨5.0‑8.0g、氯化钠2.3‑2.5g、琼脂5.0‑6.0g(固体)、乳糖5.0‑6.0g、葡萄糖0.05‑0.1g、硫酸亚铁0.1‑02g、硫代硫酸钠0.1‑0.15g、尿素8.0‑10.0g、0.4％酚红2.5‑3.0ml、1％玫瑰红酸2.3‑2.6ml、蒸馏水500ml。下层：蛋白胨0.3‑0.6g、氯化钠1.3‑1.5g、琼脂0.6‑1.5g(半固体)、甘露醇0.5‑1.0g、1％中国蓝1.5‑2.0ml、蒸馏水300ml。

制备方法是：(1)上层：a将蛋白胨、氯化钠、琼脂按比例加入蒸馏水中，热熔，调PH7.2；b加入乳糖、葡萄糖、硫酸亚铁、硫代硫酸钠、酚红，压力蒸汽灭菌113℃15分钟；c再加入尿素、玫瑰红酸(2)下层：a将蛋白胨、氯化钠、琼脂按比例加入蒸馏水热熔，调PH7.6；b加入甘露醇、中国蓝，分装试管、高压113℃15分钟，冷却后加高压过的上层。注明：先将称量用具和分液烧瓶高压灭菌。中国蓝为指示剂，其水溶液应隔水煮沸无菌后使用。玫瑰红酸是乙醇溶液，无需灭菌，但加时应避开火焰，以免燃烧。

主要参考资料

[1] CN201210025431.4 一种三糖铁琼脂培养基及制备方法