荧光染料的优点:
使用简便;
可以与任何PCR产物结合;
价格便宜;
荧光染料的缺点:
不能区分不同的双链DNA
引物二聚体会影响检测的敏感性
非特异性产物会影响结果的敏感性
引物二聚体和非特异性扩增问题可以通过熔解曲线 (Melting curve) 进行识别,进而通过PCR引物的设计和反应条件的优化得以解决。
总的来说,SYBR Green I方法是一种最基础也最常用的Real-time qPCR实验手段。
产品名称 |
路邓葡萄球菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
英文名称 |
Staphylococcus lugdunensis |
货号 |
XGR97243 |
荧光化学物质:
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:
1. TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。
2. SYBR荧光染料:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。PCR产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定DNA序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括绝对定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人神经特异性烯醇化酶(NSE)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:ENO2, HEL-S-279, NSE, Enolase 2 Human NSE(Neuron Specific Enolase) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组NSE浓度
ant-hg-1 Hygromycin B Gold (solution) 1 g (10 x 1 ml)
ant-pr-1 Puromycin (solution) 100 mg (10 x 1 ml)
ant-zn-1p Zeocin™ (powder) 1 g (powder)
ant-ph-2p Phleomycin (powder) 250 mg
ant-gn-1 G418 (solution) 1 g (10 x 1ml)
生化分析检测实验技术服务次Ondansetron996142昂丹司琼
南美顶级胎牛血清0mlOndansetron hydrochloride996141盐酸昂丹司琼
Rhodamine Phalloidin0ulBupivacaine hydrochloride10盐酸布比卡因
Green Fluorescent Protein (GFP) Antibody5mgAmbroxol hydrochloride238282盐酸氨溴索
MyHC (MF) 上清液1mlBenazepril hydrochloride865414盐酸贝那普利
3-(Hydroxymethyl)cyclopentanol 中文名: 分子式:C6H12O2 乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒 可见分光光度法 50管/48样
3-(Hydroxymethyl)-3-nitro-1-(4-octylphenyl)-1,4-butanediol 中文名: 分子式:C19H31NO5 组织及血液酸性0酸酶(ACP)试剂盒 可见分光光度法 50管/24样
3-(Bromomethyl)-2-cyclopropyl-4-(4'-fluorophenyl)quinoline 中文名: 分子式:C19H15BrFN 组织及血液碱性0酸酶(AKP/ALP)试剂盒 可见分光光度法 50管/24样
3-(Boc-Amino)piperidine 中文名: 分子式:C10H20N2O2 血清铁 英文名称: Human serum Lron 规格: 48T/96T 英文缩写: Lron
3-(5-(2-Aminopropyl)-7-cyanoindolin-1-yl)propyl benzoate (2R,3R)-2,3-dihydroxysuccinate 中文名: 分子式:C26H31N3O8 可溶性ENG/sCD105 英文名称: Human soluble Endoglin 规格: 48T/96T 英文缩写: ENG/sCD105
产品及特点:
路邓葡萄球菌探针法荧光定量PCR试剂盒1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。