NCI-H3122人非小细胞肺癌细胞

                          NCI-H3122人非小细胞肺癌细胞 百欧博伟生物

一、细胞简介

平台编号：Bio-133625

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：NCI-H3122

细胞名称：人非小细胞肺癌细胞

产品类别：人源细胞系

生长特性：贴壁生长

培养体系：1640 +10%FBS

细胞形态：上皮细胞样

冻存条件：无血清细胞冻存液

传代方法：第一次建议1:2传代  冻存条件 细胞库无血清冻存液

细胞描述：TR鉴定正确本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。  

培养备注：用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞收到后的处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）

三、细胞培养步骤

1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

3、细胞冻存：

（1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

（2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

（3）用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；

（4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

四、处理方法

收到细胞后,检查外包装是否完整,细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题,请即时联系。并进行以下操作:

1、75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2、将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理,以稳定细胞状态。

3、预热培养基(含10%胎牛血清,1%双抗)。

4、显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(40×,100×,200×各一张)。

5、若细胞密度较小,无菌操作,去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上,进行传代。

五、实验操作步骤

a、采用认可的方案处死啮齿动物。    

b、立即在无菌超净台内用70%乙醇擦洗整个动物。  

c、用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用无菌镊子将皮肤扯向后腿。   

d、用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部,取出含有胚胎的子宫,置于无菌的培养皿上。   

e、剔除胚胎周围的包膜,将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。   

f、漂洗胚胎,去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。

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