CY5-NHS酯(水溶性)

CY5-NHS酯; CY5 NHS ESTER，Cy5-SE

分子式：C37H43N3O10S2

分子量：753.88

溶解性：溶于水；DMSO

EX激发波长 646 nm

EM发射波长 664nm

用途：花菁染料Cy5，常被应用于生物分子标记，荧光成像及其他荧光生物分析。他们广泛应用于多肽，蛋白，核苷酸等。Cy5染料具有增强荧光结合后的蛋白质。

储存条件：避光 -20°C避光

运输条件：2~8℃运输

使用方法推荐（仅供参考）

水溶性Cy5 NHS标记 (D-ser2)-leucineenkephalin

1. Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL DMSO后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate ( 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。(Dye 和peptide 投料比是 1:1)

2. 然后加入15 μL三乙胺，常温避光搅拌反应混合物过夜。

3. 用HPLC 纯化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上样注入2×400 μL，30分钟梯度洗脱

从0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30，流速4mL /min。(对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相)

4. 收集适当的色带峰，标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。

5. 产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光储存;必要时可用质谱表征。

6.CyDye标记的蛋白稳定性取决于蛋白本身。例如标记的IgG在4 ℃可避光保存2月;

更长期的保存需加入等体积的甘油-20 ℃避光保存。

F/P计算：

Cy5 在650 nm 的摩尔吸光系数为250 000 M-1 cm-1 ，所用蛋白在280 nm处的摩尔吸光系数为 170000 M-1 cm-1;

Cy5在280nm处的吸收是650nm处的5%。按以下公式计算F/P值。

[Cy5 dye] = (A650)/250 000

[peptide] =[A280 -(0.05×A650)]/170000

F/P final= [dye]/[peptide]= {0.68×A650}/ {A280 - (0.05×A650)}