BCA法蛋白浓度测定试剂盒

BCA法蛋白浓度测定试剂盒

一、产品简介。

BCA 法蛋白浓度测定试剂盒是目前测定蛋白浓度的常用试剂，含有 BCA（bicinchonininc acid）的 A 液与含有二价铜离子 B 液混合，即成为苹果绿的 BCA 工作液。加入含有蛋白质的样品后，工作液中的 BCA 与蛋白质结合后，蛋白质将 Cu2+还原为 Cu+，工作液由原来的绿色变成紫色，在 562nm 处具有吸收峰，且光吸收值与蛋白质浓度成正比。因此，可以通过测定工作液的光吸收值来计算样品中的蛋白浓度。

二、运输与存储条件。

本产品低温运输，各组份依据保存条件分开保存，有效期 12 个月。

三、特点与优势。

1. 灵敏度高。检测浓度下限达到 10 μg/ml，最小检测蛋白量达到 0.2 μg。

2. 抗干扰能力强。常用浓度的去垢剂，如 SDS，Triton X-100，Tween-20 不影响检测结果。

四、自备试剂与耗材。

ddH2O，96 孔板等。

五、使用说明（96 孔板法）。

1. 配制 BCA 工作液。根据标准品和待测样品数量，按照每个样品需要200 μL工作液的标准计算工作液体积，并按照BCA-A液：BCA-B液=50:1的比例配制BCA工作液。

2. 将蛋白标准品用ddH2O稀释50倍，配制成0.5 mg/mL。

3. 将稀释的蛋白标准液加入96孔板孔中，体积分别为0、1、2、4、8、12、16、20 μl，并加入灭菌ddH2O补足体积到20 μl，对应的蛋白浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/ml。

4. 将待测样品加入96孔板孔，并利用灭菌ddH2O补足体积到20 μl。每组样品设置3个重复。

5. 各孔加入200 μl BCA工作液，振荡混匀，37 oC孵育30 min，冷却至室温。

6. 用酶标仪测定562 nm处光吸收值（OD values），若无562 nm的滤光片，也可以测定540-595 nm波长的光密度值。

7. 根据标准曲线和样品稀释倍数计算蛋白浓度。

六、注意事项。

1. BCA法也可使用分光光度计测定，并根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液用量，标准品和待测样品用量不变。

2. BCA法蛋白浓度测定试剂受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）、尿素、蔗糖和脂类的影响，应保证蛋白样品中不含有以上试剂。

3. BCA工作液与样品混合后，可以37 ℃孵育30 min，也可以室温放置2 h。

4. BCA法测定蛋白浓度时，工作液颜色会随着孵育时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果样品中的蛋白浓度较低，可适当延长孵育时间。